Vörur

Greining á próteómbreiðum fosfórunaratburðum er enn mikil greiningaráskorun vegna gríðarlegs flókins próteinfosfórunarneta.Í þessari vinnu metum við fyllingu Lys-N, Lys-C og trypsíns með tilliti til getu þeirra til að leggja sitt af mörkum til alþjóðlegrar greiningar á fosfópróteininu.Fáguð útgáfa af sterkum katjónaskiptum með lágt pH var notuð til að aðskilja N-endalega asetýleruð, fosfórýleruð og óbreytt peptíð á skilvirkan hátt.Alls var hægt að bera kennsl á 5036 óþarfa fosfópeptíð með rangri uppgötvun hlutfalls <1% frá 1 mg af próteini með því að nota blöndu af ensímunum þremur.Gögnin okkar leiddu í ljós að skörun á milli fosfópeptíðgagnasettanna sem mynduð voru með mismunandi próteasum var léleg, en skörun á milli tveggja svipað myndaðra tryptic gagnasetta reyndist vera að minnsta kosti 4 sinnum meiri.Þannig gerði samhliða notkun Lys-N og trypsíns 72% aukningu á fjölda greindra fosfópeptíða samanborið við trypsín eitt sér, á meðan trypsín eftirgerð tilraun leiddi aðeins til 25% aukningar.Svona, þegar við einblíndum eingöngu á trypsín og Lys-N gögnin, greindum við 4671 fosfópeptíð sem ekki eru óþarfi.Frekari greining á fundustum stöðum sýndi að Lys-N og trypsín gagnasettin voru auðguð á marktækt mismunandi fosfórýleringarmótífum, sem sannaði enn frekar að fjölpróteasaaðferðir eru mjög dýrmætar í fosfópróteómagreiningum.