Vörur

Ný afkastamikil vökvaskiljun fyrir glýkósýltransferasa byggt á afleiðumyndun með antranílsýru og flúrljómunargreiningu.

Próf voru þróuð með því að nota einstaka merkingarefnafræði 2-amínóbensósýru (2AA; antranílsýra, AA) til að mæla virkni bæði β1-4 galaktósýltransferasa (GalT-1) og α2-6 sialýltransferasa (ST-6) með afkastamiklum vökva litskiljun (HPLC) með flúrljómunargreiningu (Anumula KR. 2006. Framfarir í flúrljómunarafleiðuaðferðum fyrir hágæða vökvaskiljun á glýkópróteinkolvetnum. Anal Biochem. 350:1-23).N-asetýlglúkósamín (GlcNAc) og N-asetýllaktósamín voru notuð sem viðtakar og úridíndífosfat (UDP)-galaktósa og cýtidínmónófosfat (CMP)-N-asetýlneuramínsýra (NANA) sem gjafar fyrir GalT-1 og ST-6, í sömu röð.Ensímvörur voru merktar á staðnum með AA og voru aðskildar frá hvarfefnum á TSKgel Amide 80 súlu með því að nota eðlilegar fasa aðstæður.Ensímeiningar voru ákvarðaðar út frá toppsvæðunum með samanburði við samhliða afleiddu staðla Gal-β1-4GlcNAc og NANA-α2-6 Gal-β1-4GlcNAc.Línulegleiki (tími og ensímstyrkur), nákvæmni (innan- og milligreiningu) og endurgerðanleiki prófanna var staðfestur.Rannsóknirnar reyndust gagnlegar til að fylgjast með ensímvirkni við einangrun og hreinsun.Mælingarnar voru mjög næmar og virkuðu jafnt eða betri en hefðbundnar mælingar sem byggjast á geislavirkum sykri.Einnig er hægt að nota greiningarsniðið til að mæla virkni annarra transferasa, að því tilskildu að kolvetnasamtakarnir innihaldi afoxandi enda til merkingar.Greining fyrir glýkópróteintaka var þróuð með því að nota IgG.Stutt HPLC prófílaðferð var þróuð til að aðskilja IgG glýkana (tvíæðar G0, G1, G2, ein- og tvísíaýleruð), sem auðveldaði ákvörðun GalT-1 og ST-6 virkni á skjótan hátt.Ennfremur ætti þessi prófunaraðferð að reynast gagnleg til að fylgjast með breytingum á IgG glýkönum í klínískum aðstæðum.