Vörur

Til að mæla sérstaklega nokkur umbrotsefni 5-flúoróúrasíls (5-FU) og tveggja innrænna einfosfatkjarna, þróuðum við upprunalega aðferð sem byggir á vökvaskiljun-tandem massagreiningu (LC-MS/MS).Þessi prófun gerði kleift að ákvarða: (i) innanfrumuframleiðslu á 5-flúor-2'-deoxýúridín-5'-mónófosfati (5-FdUMP) úr 5-FU eða 5-flúor-2'-deoxýúridíni (5-FdUrd) , (ii) áhrif 5-FdUMP styrks á innanfrumu 2'-deoxýúridín-5'-mónófosfat (dUMP)/týmidín-5'-mónófosfat (TMP) hlutfallið, og (iii) seytingarmagn 5-FdUMP og 5-FU úr ræktuðum frumum úr mönnum með ABC flutningsefnum.Við tilraunaaðstæður okkar voru frumur ræktaðar með 5-FU eða 5-FUrd.Síðan voru frumuprótein felld út með metanóli.Þessi aðferð veitti mikla útdráttarbata.Að auki, til að mæla 5-FU og 5-FdUMP seytingu frá frumum, gerðum við magngreiningu á þessum sameindum í ræktunarmiðli.Miðlar voru ýmist sprautaðir beint (5-FU) eða í fastfasaútdrætti með því að nota Oasis Wax útdráttarhylki (5-FdUMP).Aðskilnaður greiniefna var framkvæmdur á dC18 Atlantis 3,5 μm, (100 mm × 2,1 mm id) súlu með ísókratískri stillingu með því að nota ammóníumformat stuðpúða/metanól/vatn (5/5/90, v/v) sem hreyfanlegur fasa.Keyrslutími fór ekki yfir 6,2 mín.Greiningarefnin voru jónuð í rafúðaviðmóti við neikvæða jónaham.Við staðfestum aðferðina á bilinu 2,5-150 ng mL -1 samkvæmt efnasamböndunum.Breytileiki innan og milli prófa var minni en 10% á sjö dögum.Öll efnasambönd voru stöðug í frumum eða í ræktunarmiðli þegar sýni voru geymd við -20 °C í að minnsta kosti tvær vikur og eftir þrjár frystingar-þíðingarlotur.Engin fylkisáhrif komu fram í báðum miðlum.